Rotor-Gene链融解曲线法甲基化标记筛选技术的建立

作者：莫耀南; 赵贵森; 郑海燕; 刘良; 杨渝珍

来源：郑州大学学报(医学版), 2008, (01): 116-119.

DOI：10.13705/j.issn.1671-6825.2008.01.080

• DNA甲基化
• 链融解曲线法
• 亚硫酸氢盐
• 雄激素受体

目的:建立基于Rotor-Gene的链融解曲线法的甲基化标记筛选技术,分析各种影响因素,评估其实用性。方法:克隆Hela细胞雄激素受体基因外显子-1的Bisulfite-PCR产物,挑出经测序证实的可以代表不同甲基化程度的一组质粒,并以之为模板,在Rotor-Gene3000实时定量PCR仪进行扩增和链融解,分析融链温度、链融解曲线与甲基化程度、甲基化模式的相关性及各种影响因素。结果:基于Rotor-Gene的链融解曲线法,不仅可以区分甲基化与非甲基化,而且能够鉴别片段内细微的甲基化差异;主要的影响因素有升温幅度、缓冲液离子强度、产物浓度等。结论:基于Rotor-Gene的链融解曲线法,可以集扩增和链融解于一体,是一种经济简便的甲基化分析技术,可用于样品的甲基化筛选。

• 单位
  华中科技大学同济医学院