miR-181a-5p对人主动脉平滑肌细胞成骨样分化的影响

作者：张帆; 程乃萱; 韩迎春; 张海波; 杜杰; 张聪聪^*

来源：中国动脉硬化杂志, 2021, 29(01): 24-29.

DOI：10.3969/j.issn.1007-3949.2021.01.005

• 人主动脉平滑肌细胞
• 成骨样分化
• miR-181a-5p
• 血管钙化

目的观察miR-181a-5p对动脉钙化细胞模型的影响,探讨其可能的作用机制。方法培养人主动脉平滑肌细胞(HASMC),经成骨样分化诱导后使用茜红素染色检测细胞成骨样分化的程度,采用real-time PCR检测成骨样分化标志基因骨钙素(OCN)、Runt相关转录因子2(RUNX2)和碱性磷酸酶(ALP)的mRNA表达变化,以及miR-181a-5p的表达变化,分析miR-181a-5p与成骨样分化相关基因表达水平的相关性。miR-181a-5p mimic转染用于上调HASMC内miR-181a-5p的表达。使用TargetScan数据库预测miR-181a-5p发挥作用的靶基因。使用real-time PCR检测miR-181a-5p过表达后对靶基因表达的影响。结果 HASMC经诱导成骨样分化后,茜红素染色阳性区域和细胞内钙含量逐渐增加,细胞中成骨样分化相关基因OCN、RUNX2和ALP的表达随时间延长逐渐升高,而miR-181a-5p的表达逐渐下降(P<0.05)。相关性分析显示miR-181a-5p的表达与OCN、RUNX2和ALP的表达均呈负相关(P<0.05)。使用miR-181a-5p mimic转染HASMC后细胞内miR-181a-5p的表达高于对照mimic组,细胞内钙含量及RUNX2和OCN的表达均低于对照mimic组(P<0.05)。TargetScan数据库预测结果显示miR-181a-5p可与促成骨样分化基因丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)和丝裂原活化蛋白激酶8(MAPK8)的3′UTR区结合,miR-181a-5p mimic组HASMC中靶基因MAPK1和MAPK8的表达显著下调(P<0.05)。结论血管平滑肌细胞成骨样分化时下降的miR-181a-5p可抑制成骨样分化,其可能的机制是抑制促钙化信号转导分子MAPK1和MAPK8的表达。

• 单位
  首都医科大学附属北京安贞医院; 北京市心肺血管疾病研究所