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摘要
目的构建表达人类晶状体来源的上皮生长因子p52(lens epithelium derivedgrowthfactor p52,LEDGFp52)重组腺病毒载体,检测LEDGFp52重组腺病毒能否在真核细胞中有效表达目的基因。方法将LEDGFp52基因片段亚克隆到腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV上构建腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV-LEDGFp52,将腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV-LEDGFp52与5型腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转染BJ5183细菌,经细菌内同源重组产生携带LEDGFp52基因的重组腺病毒载体pAd-LEDGFp52,将pAd-LEDGFp52经脂质体法转化293细胞包装产生重组腺病毒Ad-LEDGFp52,将Ad-LEDGFp52体外转染293细胞,CPE法及Westernblot观察目的基因的表达。结果构建了表达LEDGFp52基因的重组腺病毒质粒,E.coli内成功同源重组腺病毒,在293细胞内包装产生重组腺病毒Ad-LEDGFp52,滴度可达5×1012PFU·L-1。在真核细胞中有效表达目的基因LEDGFp52,出现显著的CPE效应。结论成功构建表达LEDGFp52的重组腺病毒载体,为进一步进行LEDGF p52基因功能的研究提供了实验基础。
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