坏死性小肠结肠炎早产儿肠组织差异性表达nesfatin-1及机制探讨

作者：邱红^*; 李艳红; 王晓君; 吕勤

来源：中国病理生理杂志, 2020, 36(12): 2227-2233.

• 早产儿
• 坏死性小肠结肠炎
• Nesfatin-1
• Toll样受体4

目的:分析nesfatin-1在坏死性小肠结肠炎(NEC)早产儿肠组织中的表达情况,并探讨nesfatin-1对脂多糖(LPS)诱导的NEC结肠细胞模型的影响及作用机制。方法:收集2017～2019年间在本院接受NEC肠道手术的早产儿中获得小肠组织。应用RT-qPCR检测nesfatin-1在NEC的mRNA在小肠组织中的表达。以人胎正常结肠上皮细胞HCoEpiC和人结肠癌细胞Caco-2为研究对象,分别采用nesfatin-1过表达载体及其阴性对照载体以及pcDNA-TLR4(Toll样受体4)处理细胞。采用ELISA法检测细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和IL-10的含量。采用Western blot分析nesfatin-1、TLR4、NLRP3、黑色素瘤缺乏因子-2(AIM2)、caspase-1和凋亡相关斑点样蛋白(ASC)的表达和共免疫沉淀法分析nesfatin-1与TLR4的关系。结果:NEC早产儿小肠组织中nesfatin-1的表达明显低于健康组(P<0.01)。与对照组相比,LPS诱导的肠上皮细胞HCoEpiC和HT-29细胞中的nesfatin-1表达降低(P<0.01),而nesfatin-1转染逆转了LPS的刺激作用,并且nesfatin-1过表达降低了TNF-α和IL-6的水平(P<0.05),并增加了IL-10的水平(P<0.05)。此外,nesfatin-1过表达抑制了NLRP3、AIM2、caspase-1和ASC的表达。TLR4在NEC组织样本中的表达明显高于健康婴儿(P<0.05)。Pearson相关分析表明nesfatin-1和TLR4之间存在显著负相关(r=-0.816,P<0.01)。通过免疫沉淀发现TLR4与nesfatin-1能够在细胞内共沉淀。结论:在NEC早产儿肠组织中,nesfatin-1通过靶向TLR4介导炎症反应,从而保护肠细胞免受LPS诱导的炎症反应,可能成为抗NEC治疗的潜在靶点。

• 单位
  宁波市妇女儿童医院