蛋白磷酸酶1调节亚基14B对神经母细胞瘤细胞有丝分裂进程的调控作用

作者：简肖肖; 张万鹏; 常艳; 张学敏; 李慧艳; 胡怀斌^*

来源：中国药理学与毒理学杂志, 2023, 37(09): 688-694.

DOI：10.3867/j.issn.1000-3002.2023.09.006

• 蛋白磷酸酶1调节亚基14B
• 神经母细胞瘤
• 有丝分裂

目的 研究蛋白磷酸酶1调节亚基14B(PPP1R14B)对神经母细胞瘤（NB）细胞有丝分裂进程的调控作用，为其治疗提供潜在新靶标。方法 在NB细胞SK-N-BE(2)-M17中转染2条不同序列小干扰RNA(siRNA)(PPP1R14B siRNA#1和#2)敲低PPP1R14B，实时定量PCR和Western印迹法检测PPP1R14B的敲低效果。在SK-N-BE(2)-M17 GFP-H2B细胞中转染PPP1R14B siRNA#1和#2,Time-lapse活细胞成像技术动态监测敲低PPP1R14B对该细胞有丝分裂进程的影响。采用酶切克隆法构建靶向PPP1R14B的2条不同序列短发夹RNA(shRNA)(sh PPP1R14B#1或#2)慢病毒质粒，并感染SK-N-BE(2)-M17细胞建立PPP1R14B稳定敲低细胞，Western印迹法检测其敲低效果，克隆形成实验观察敲低PPP1R14B对SK-N-BE(2)-M17细胞生长的影响。基于GEO数据库的临床数据，按NB不同临床分期分组，分析各组样本中PPP1R14B mRNA表达水平及其与预后的相关性。结果 与转染对照siRNA相比，转染PPP1R14B siRNA#1和#2均可有效敲低SK-N-BE(2)-M17细胞中PPP1R14B mRNA和蛋白表达（P<0.01）。Timelapse活细胞成像结果显示，与转染对照siRNA相比，转染PPP1R14B siRNA#1和#2组SK-N-BE(2)-M17GFP-H2B细胞有丝分裂期时间延长（P<0.05），且主要是有丝分裂前中期时间显著延长（P<0.01）。Western印迹法结果显示，与转染对照shRNA相比，转染sh PPP1R14B#1和#2均可有效敲低SK-N-BE(2)-M17细胞中PPP1R14B蛋白表达（P<0.01）；克隆形成实验结果表明，转染sh PPP1R14B#1或#2稳定敲低组细胞克隆形成数亦明显降低（P<0.01）。GEO数据库分析显示，PPP1R14B mRNA表达水平与NB恶性程度呈正相关，与患者预后呈负相关。结论 敲低PPP1R14B导致SK-N-BE(2)-M17细胞有丝分裂期阻滞和生长减慢，PPP1R14B在NB发生发展中发挥重要作用。

• 单位
  首都医科大学附属北京儿童医院