大肠杆菌MalQ基因的克隆与原核融合表达

作者：王水兴; 郭勇; 许杨; 李燕萍

来源：华南理工大学学报(自然科学版), 2008, (04): 122-126.

DOI：10.3321/j.issn:1000-565X.2008.04.023

• 麦芽糖转糖基酶
• 基因重组
• 融合表达
• 大环糊精
• 基因克隆

为了构建用于表达麦芽糖转糖基酶的基因工程菌,用PCR方法获得大肠杆菌(Escherichia coli)K12MalQ基因.将该基因插入原核表达载体pET-DsbA中,对质粒所含外源片段进行双向测序,并经局部相似性基本查询工具(BLAST)比较分析,发现其与GenBank中报道的大肠杆菌K12MalQ基因的同源性高达99%.重组质粒转化E.coliBL21(DE3)plysS,经异丙基硫代-β-D-半乳糖(IPTG)诱导后以融合蛋白形式表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示MalQ基因与DsbA表达的融合蛋白在目标位置相对分子质量约为103 000处有明显条带.经薄层层析分析粗酶液酶处理的麦芽三糖溶液,证实粗酶液具有麦芽糖转糖基活性.

• 单位
  南昌大学; 华南理工大学; 中德联合研究院