鹅骨骼肌卫星细胞的分离培养与鉴定

作者：张力; 许加龙; 黄锦钰; 许子月; 雷昕诺; 卢会鹏; 朱睿; 孙伟翔; 曹海月; 王安平; 朱善元^*

来源：畜牧兽医学报, 2023, 54(10): 4186-4195.

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旨在建立鹅骨骼肌卫星细胞体外分离、培养、纯化及鉴定的方法。本研究选取健康10周龄溆浦鹅仔鹅为试验材料，采用分散酶Dispase II和胶原酶II共同作用肌肉组织分离得到卫星细胞，利用差速贴壁法纯化卫星细胞，在体外培养过程中，含有20%FBS并添加bFGF的DMEM/F12生长完全培养基能较好维持卫星细胞的分化潜能，培养过程中涉及的培养皿需经基质胶特别包被处理；诱导分化出成熟肌管后，采用免疫荧光法和Western blotting检测肌球蛋白重链MyHC的表达，采用qRT-PCR检测Pax7、MyoD1、MyoG基因在诱导分化前(growth medium, GM)和分化后(differentiation medium, DM)的相对表达量，分化前后每组均3个重复。结果表明，新分离得到的卫星细胞体积较小，折光性强，贴壁后呈中间彭起两端针状的梭形结构，经免疫荧光鉴定呈Pax7阳性；诱导分化后可形成成熟多核肌管，免疫荧光检测成肌特异性标志MyHC呈阳性，统计分化指数高达78%(P<0.01);qRT-PCR检测标志性基因Pax7、MyoD1、MyoG呈阳性，并且分化前Pax7基因相对表达量是分化后的2.22倍(P<0.01),而分化后标志性基因MyoD1、MyoG的相对表达量分别是分化前的1.90(P<0.01)和44.22倍(P<0.01);Western blotting结果显示分化后MyHC蛋白表达水平明显升高。综上所述，本研究建立了一种基于胶原酶Ⅱ和分散酶Dispase II的混合酶分离鹅骨骼肌卫星细胞的方法，提供的培养体系能够使细胞在体外培养过程中维持巨大的分化潜能，为鹅肌肉组织生长发育分子调控机制的研究提供了良好的细胞模型。

• 单位
  江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室; 南京大学; 江苏农牧科技职业学院