基于CRISPR-Cas9系统的HSV-1基因治疗载体的快速构建

作者：杨雯虹; 杨丽娟; 李志伟; 聂祖庆; 王若花; 黄新伟; 曹霞

来源：中国生物化学与分子生物学报, 2017, 33(10): 1076-1082.

DOI：10.13865/j.cnki.cjbmb.2017.10.15

• 1型单纯疱疹病毒
• CRISPR-Cas9基因编辑
• 同源重组修复
• 病毒载体
• 基因转导

基因改造的1型单纯疱疹病毒(HSV-1)载体在肿瘤溶瘤病毒治疗及基因转导中具有广泛的应用前景。本研究报道一种基于CRISPR-Cas9系统的高效快速的重组HSV-1载体构建方法。首先,双顺反表达靶点g DNA和Cas9核酸酶的基因编辑质粒与同源重组模板质粒共转染Vero细胞后,用亲本株感染细胞;然后,Cas9对胞内病毒基因组定点切割,诱导外源基因同源重组,修复至病毒基因组指定位点。通过PCR、Western印迹、免疫荧光等方法证明,相比于传统自发同源重组的构建方法,该方法能显著提升病毒重组率(4.1%vs 1.1%)。同时,本研究建立了一种新的单克隆病毒纯化方案,简化了阳性病毒筛选步骤。本研究结果提供了一种高效快速的重组HSV-1构建方法,这对于HSV-1相关基因治疗及其病理机制研究将具有重要意义。

• 单位
  中心实验室; 昆明医科大学第二附属医院