摘要
目的 可诱导共刺激分子(ICOS)高表达的T细胞(JurKat TICOS)刺激人主动脉平滑肌细胞(HASMC),分析HASMC基因表达水平变化,筛选并确定HASMC表型变化的关键基因。方法 JurKat TICOS细胞、JurKat T细胞(ICOS正常表达的T细胞)分别与HASMC共培养,转录组测序技术(RNA-seq)分析HASMC表达谱,对差异表达基因(P≤0.05、|log2Fold Change|≥1.0)进行聚类分析、基因本体论(GO)功能富集分析、京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,分析HASMC表型转化相关的信号通路基因变化情况。采用qRT-PCR对部分关键差异表达基因进行验证。结果 JurKat TICOS细胞与HASMC共培养组、JurKat T细胞与HASMC共培养组之间比较发现435个差异基因(P≤0.05,|log2Fold Change|≥1.0),其中375个基因表达上调(86.2%),60个基因表达下调(13.8%)。GO功能富集结果表明,这些基因参与了细胞活化、细胞粘附、调节免疫效应过程、白细胞迁移、血小板活化、细胞趋化作用、免疫突触的组成;KEGG富集分析结果表明,差异基因参与了Fcγ受体介导的吞噬作用、细胞周期信号通路、细胞粘附分子、T细胞受体信号通路等。将RNA-seq差异基因映射到平滑肌细胞表型转化的相关信号通路上,发现有34个差异基因(P≤0.05,|Fold Change|≥1.5)富集到PI3K/Akt信号通路上。利用qRT-PCR技术对其中10个关键基因进行验证,验证结果与RNA-seq趋势一致。结论 JurKat TICOS细胞刺激HASMC对HASMC基因表达谱具有影响,HASMC表型转化过程中PI3K/Akt信号通路可能发挥着主要的调控作用,为阐明ICOS过表达的T细胞对HASMC的作用提供了实验依据。
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