稳定表达犬SLAM受体的Vero细胞系的建立与应用

作者：朱璐宇; 彭丽艳; 周雨霞^*; 王喜军^*; 步志高^*

来源：内蒙古农业大学学报(自然科学版), 2018, 39(06): 7-12.

DOI：10.16853/j.cnki.1009-3575.2018.06.002

• 信号淋巴细胞活化分子
• Vero细胞
• 犬瘟热病毒
• 病毒分离

信号淋巴细胞活化分子是(Signaling lymphocyte activation molecule,SLAM)犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)和麻疹病毒(Measles virus,MV)等麻疹病毒属病毒的主要细胞受体,在病毒入侵细胞的过程中具有重要作用。为了构建稳定表达犬SLAM(d SLAM)受体的Vero细胞系,本研究将d SLAM基因克隆至真核表达质粒p CAGG-TK-neo中,在d SLAM基因3’端引入Flag标签序列作为分子标记,并在其下游引入9 nt的Linker序列、猪捷申病毒(Porcine teschovirus,PTV) 2A基因以及红色荧光蛋白m Cherry基因,构建了重组质粒p CAGG-dSLAMFlag-mCherry。用该重组质粒转染Vero细胞,经G418压力筛选、红色荧光蛋白表达及表达绿色荧光蛋白的重组CDV(r20/8-EGFP)感染鉴定后,筛选到稳定表达d SLAM的细胞系。CDV野生型分离株JL17感染试验结果显示,JL17株在第15代次的Vero-dSLAM细胞上可良好生长,而在Vero细胞上不能形成细胞病变。结果表明,Vero-dSLAM细胞可稳定表达d SLAM,为CDV野生型毒株的分离和致病机制研究奠定了基础。

• 单位
  兽医生物技术国家重点实验室; 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所; 内蒙古农业大学