miRNA-5089-5p体外通过调节组织蛋白酶B表达抑制食管癌细胞增殖和迁移

作者：常城; 顾园^*; 王品发; 滕小军

来源：肿瘤研究与临床, 2021, 33(05).

• 食管肿瘤
• 微RNAs
• 组织蛋白酶B
• miR-5089-5p

目的探讨miRNA-5089-5p(miR-5089-5p)体外对食管癌细胞增殖和迁移能力的影响及其与组织蛋白酶B(CTSB)基因表达的关系。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测2017年3月至2019年12月鄂东医疗集团黄石市中心医院食管癌手术切除癌组织标本及相应癌旁组织标本31例, 以及食管癌TE-13、EC9706、Eca109、KYSE30细胞株和正常食管黏膜上皮HET-1A细胞miR-5089-5p的表达水平。选择miR-5089-5p表达量最低的食管癌细胞, 分为两组, 分别转染miR-5089-5p模拟物(miR-5089-5p组)及其阴性对照序列(阴性对照组);转染48 h后, qRT-PCR检测两组细胞miR-5089-5p表达水平;采用CCK-8法和划痕愈合实验分别检测两组细胞的增殖和迁移能力。用microRNA.org、Deepbase v2.0在线工具预测miR-5089-5p的靶基因, 并采用双荧光素酶报告基因实验进行验证。qRT-PCR和蛋白质印迹法检测miR-5089-5p组、阴性对照组细胞靶基因的表达水平, 同时采用蛋白质印迹法检测两组细胞增殖相关蛋白PCNA、Ki-67和迁移相关蛋白N-Cadherin、Twist表达。结果食管癌患者癌组织和癌旁组织中miR-5089-5p的相对表达量分别为1.54±0.53和7.07±1.25(t=24.06, P<0.01);各食管癌细胞株miR-5089-5p相对表达量均低于正常食管黏膜上皮HET-1A细胞(均P<0.05), 相对表达量最低的是Eca109细胞(0.12±0.03)。与阴性对照组相比, 随着转染时间延长, miR-5089-5p组Eca109细胞增殖能力逐渐降低, 从48 h开始两组间差异均有统计学意义(均P<0.05);迁移能力亦降低[细胞划痕愈合率:(29±5)%比(64±8)%, t=3.91, P<0.01]。在线工具预测miR-5089-5p的靶基因可能是CTSB, 双荧光素酶报告基因实验证实miR-5089-5p互补结合CTSB 3’’UTR。qRT-PCR检测显示, 与阴性对照组相比, miR-5089-5p组Eca109细胞CTSB mRNA相对表达量降低(0.23±0.04比1.01±0.09, t=8.27, P<0.01), 蛋白质印迹法检测显示, CTSB蛋白表达水平亦降低, 同时细胞增殖相关蛋白PCNA、Ki-67和细胞迁移相关蛋白N-Cadherin、Twist表达水平均降低。结论食管癌患者癌组织和细胞株中miR-5089-5p均低表达, miR-5089-5p能抑制食管癌Eca109细胞增殖和迁移能力, 此作用可能是通过下调CTSB基因表达实现的。

• 单位
  湖北理工学院; 黄石市中心医院