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摘要
为探究紫苏（Perilla frutescens L.）药用活性成分酚酸生物合成途径中的关键基因。基于前期紫苏转录组测序数据，筛选出酚酸合成途径中的差异表达基因分支酸合成酶基因（chorismate synthase， CS），获得PeCS基因开放阅读框（ORF），利用生物信息学技术对PeCS基因功能做出初步预测，构建pET30a-PeCS原核表达载体，并转化大肠杆菌BL21 （DE3），IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE检测。通过实时荧光定量PCR （qRT-PCR）技术检测紫苏不同组织（根，茎，叶）中PeCS表达水平。克隆得到紫苏PeCS基因开放阅读框（ORF）长度为877 bp，编码291个氨基酸，生物信息学预测为亲水性蛋白，定位于叶绿体，该蛋白相对分子质量为31659.16，PeCS基因编码蛋白不含信号肽且无跨膜区，亚细胞结构定位于叶绿体；所构建pET30a-PeCS 原核表达载体，在大肠杆菌BL21 （DE3）中表达的最适条件为15 ℃、0.5 mmol/L IPTG培养16 h，PeCS重组蛋白主要以包涵体形式存在，蛋白分子量与预测相符。qRT-PCR分析显示PeCS基因在紫苏不同器官组织中均有表达，且在叶中的表达量最高，在茎中表达量最低。成功克隆紫苏分支酸合成酶PeCS基因，有助于更深入的阐释紫苏酚酸合成途径和调控机制。
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单位福建农林大学; 生命科学学院
