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摘要
为了获得腐败梭菌α毒素和产气荚膜梭菌ε毒素融合蛋白并评价其免疫保护效力，试验采用PCR扩增方法将两种毒素融合基因ETX-CSA克隆至pvexk载体中，选取阳性克隆子转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中，然后使用1%乳糖诱导阳性菌株进行蛋白质表达，通过SP阳离子柱纯化获得融合蛋白，通过SDS-PAGE、Western-blot验证融合蛋白的表达情况，通过将融合蛋白与佐剂混合配制成疫苗免疫家兔获取血清，然后使用免疫血清进行中和试验研究融合蛋白的免疫原性和免疫中和效应。结果表明：成功获得了可溶性表达的融合蛋白ETX-CSA,将纯化的ETX-CSA蛋白与佐剂混合配制成疫苗后免疫家兔所产生的血清对腐败梭菌毒素的中和效价达到1 MLD/0.1 mL(MLD为最小致死量),对D型产气荚膜梭菌毒素的中和效价达到40 MLD/0.1 mL。说明融合蛋白成功表达，其具有免疫原性，免疫兔所产生的血清能够同时中和腐败梭菌毒素和D型产气荚膜梭菌毒素。
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