肝细胞癌侧群/非侧群细胞中miRNA-21表达差异的检测

作者：吕洋; 杨珮珮; 叶龙; 赵平; 姜经航

来源：癌症进展, 2018, 16(04): 421-424.

• 肝细胞癌
• SP细胞
• miRNA-21
• 流式细胞仪

目的采用流式细胞仪优化Hoechst33342染料浓度,检测肝细胞癌(HCC)MHCC-97H细胞中侧群(SP)细胞与非侧群(NSP)细胞中微小RNA-21(miRNA-21)的表达情况。方法常规制备MHCC-97H单细胞悬液,采用不同浓度(5、6、7、8、9、10、11、12 mg/L)的荧光染料Hoechst33342染色,以维拉帕米拮抗组为对照,优化最适合的Hoechst33342染料浓度,通过流式细胞仪分离SP、NSP细胞;采用RT-PCR法检测SP、NSP细胞中miRNA-21的表达情况。结果优化Hoechst33342浓度为10 mg/L,活细胞比例较高,是最适染色的浓度,此时MHCC-97H中SP细胞比例为(8.4±0.7)%;从SP、NSP细胞中提取的总RNA纯度为1.82.0,其中没有DNA和蛋白质混杂;SP细胞的miRNA-21表达水平是NSP细胞的(7.30±0.78)倍,差异有统计学意义(P<0.05)。结论优化的Hoechst33342浓度可以提高SP细胞的纯度,同时miRNA-21表达可能与HCC干细胞分化有关。

• 单位
  荆门市第二人民医院