南极菌Pseudoalteromonas sp. A211-5产碱性α-淀粉酶Amy172的克隆表达及酶学性质研究

作者：潘爱红; 李江^*; 谷晓倩; 宋益民; 宋芳琴

来源：化学与生物工程, 2019, 36(05): 36-42.

• 碱性α-淀粉酶
• 克隆表达
• 酶学性质

对具有淀粉降解活性的南极菌Pseudoalteromonas sp.A211-5进行测序分析,根据基因注释结果,获得了一条基因序列为2 139 bp的淀粉酶基因,命名为amy172;通过特异性引物克隆获得Amy172的基因序列并进行异源表达;采用Ni-NTA层析柱对重组α-淀粉酶Amy172进行纯化,采用DNS法测定其酶学性质,采用薄层层析(TLC)技术对其酶解产物进行分析。结果表明:SDS-PAGE显示在分子量为79 kDa左右有一条明显的目的蛋白条带;重组α-淀粉酶Amy172最适温度为50℃,最适pH值为10.0,且在pH值5.0～10.0的范围内仍能保持80%以上的酶活,金属离子Fe3+、Mn2+、Mg2+、Fe2+、Ca2+、K+、Sr2+、Ni2+和Ba2+对酶活性具有抑制作用;TLC分析Amy172的酶解产物为葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖和麦芽四糖。

• 单位
  青岛科技大学; 自然资源部第一海洋研究所