猪IFN-α14的表达、纯化及抗病毒活性分析

作者：方剑玉; 白杰; 席燕燕; 黄慧敏; 徐引弟; 王改利; 张青娴; 徐彬; 李绍钰^*; **领^*

来源：中国兽医学报, 2022, 42(10): 1994-2000.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2022.10.11

• 猪IFN-α14
• 抗病毒活性
• 大肠杆菌表达
• 猪流行性腹泻病毒

干扰素(interferon, IFN)是一类具有抗病毒和免疫调节功能的细胞因子，目前已经应用于多种人和动物病毒病的预防和治疗。不同猪干扰素亚型的抗病毒活性差异较大，为了解猪IFN-α14的抗病毒活性，将猪IFN-α14基因序列进行分析，去除信号肽、优化密码子，并采用基因合成的方法合成了猪IFN-α14亚型基因，将其克隆入pCSMH原核表达载体，优化诱导条件，利用Ni琼脂糖凝胶纯化柱进行亲和层析，获得高纯度的重组猪IFN-α14蛋白，Western blot检测证明重组蛋白具有较好的特异性。用不同浓度的重组猪IFN-α14处理Vero细胞后，接种1 000 TCID50猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV),24 h收集细胞和上清，通过荧光定量检测细胞内病毒的RNA水平，同时测定细胞上清中病毒的TCID50。猪IFN-α14蛋白被成功表达并纯化，证明了10μg/L的重组猪IFN-α14干扰素能够显著抑制PEDV的复制。与本实验室前期表达纯化的猪IFN-α2、8相比，猪IFN-α14抑制PEDV复制的活性显著提高，为新型抗病毒药物开发提供了重要的依据和数据支持。

• 单位
  河南省农业科学院