转染IGF2BP3基因siRNA和真核表达质粒的神经母细胞瘤细胞侵袭凋亡变化观察

作者：朱凯; 王志茹; 高婷婷; 吕志宝^*

来源：山东医药, 2023, 63(27): 1-6.

DOI：10.3969/j.issn.1002-266X.2023.27.001

• 核糖核酸m6A甲基化读取器
• 胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白家族
• 神经母细胞瘤
• 小干扰核糖核酸
• 细胞侵袭
• 细胞凋亡

目的 观察转染胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白3(IGF2BP3)基因siRNA和真核表达质粒的神经母细胞瘤（NB）细胞侵袭凋亡变化，以探讨IGF2BP3基因对NB细胞侵袭和凋亡的影响。方法 选取NB细胞株IMR-32、SK-N-BE(2)、BE(2)-C、SH-SY-5Y，采用qRT-PCR检测IGF2BP3 mRNA、Western blotting法检测IGF2BP3蛋白、Transwell实验观察NB细胞的体外侵袭能力。根据上述实验结果，选择IGF2BP3表达水平最高的SK-N-BE(2)细胞及IGF2BP3表达水平最低的IMR-32细胞作为后续实验细胞。SK-N-BE(2)细胞转染针对IGF2BP3基因的小干扰RNA(siRNA)(SK-siIGF2BP3组)，并设立细胞对照组（SK-Control组，只含有脂质体）和siRNA对照组（SK-siNC组，转染阴性对照序列）。IMR-32细胞转染IGF2BP3真核表达质粒（IMR-IGF2BP3组），并设立细胞对照组（IMR-Control组，只含有脂质体）和空载体对照组（IMR-Vector组，转染空载体）。转染成功后，采用qRT-PCR、Western blotting法和细胞免疫荧光染色法检测各组IGF2BP3 mRNA及蛋白，Transwell实验观察各组细胞侵袭能力，流式细胞术测算各组NB细胞凋亡率，Western blotting法检测各组细胞侵袭相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin。结果 与SKControl组和SK-siNC组相比，SK-siIGF2BP3组IGF2BP3 mRNA、蛋白相对表达量降低，穿越Transwell小室膜细胞数减少，凋亡率升高（P均<0.05）；与IMR-Control组和IMR-Vector组相比，IMR-IGF2BP3组IGF2BP3 mRNA、蛋白相对表达量升高，穿越Transwell小室膜细胞数增加，凋亡率降低（P均<0.05）。在SK-N-BE(2)细胞中，与SK-siNC组及SK-Control组比较，SK-siIGF2BP3组中N-cadherin、Vimentin蛋白相对表达量下降，E-cadherin蛋白相对表达量上升（P均<0.05）；在IMR-32细胞中，与IMR-Vector组、IMR-Control组比较，IMR-IGF2BP3组N-cadherin和Vimentin蛋白相对表达量升高，E-cadherin蛋白相对表达量下降（P均<0.05）。结论 转染IGF2BP3基因siRNA的NB细胞侵袭能力减弱、凋亡率增加，转染IGF2BP3真核表达质粒的NB细胞侵袭能力增强、凋亡率降低。

• 单位
  上海交通大学; 安徽省立医院; 上海市儿童医院; 中国科学技术大学