一种敲除PD1的靶向LMP1的CAR-T细胞的制备方法和应用

作者：廖兴华; 王君; 张慧敏; 项园; 李佳蓬; 李慧; 张同存

来源：2021-01-26, 中国, CN202110101793.6.

一种敲除PD1的靶向LMP1的CAR-T细胞的制备方法,包括如下步骤：S1,构建PD1基因sgRNA质粒pGL3-U6-hPD1-sgRNA和LMP1-CAR细胞质粒LMP1-CAR PiggyBac Transposon,将pGL3-U6-hPD1-sgRNA和LMP1-CAR PiggyBac Transposon质粒与电转缓冲液混合,制得电转混合液,并用电转混合液转染PBMC细胞,得到转染后的PBMC细胞；S2,将转染后的PBMC细胞转入T细胞培养基,用磁珠激活CD3阳性T细胞,并培养扩增转染后的PBMC细胞,获得敲除PD1的LMP1-CAR-T细胞。本发明采用靶向LMP1的CAR-T细胞联合敲除PD1的联合治疗,对患者的T细胞进行PD1敲除,纠正免疫逃逸,恢复患者的免疫功能,增强CAR-T细胞攻击淋巴瘤的效应。在制备EVB淋巴瘤诊断试剂或治疗药物中的应用具有重要的临床意义。

• 单位
  武汉科技大学