miRNA靶向调控CCR7抑制结肠癌细胞增殖及侵袭的研究

作者：林汉利; 陈小欢; 王晓玲; 曾浩涛

来源：国际医药卫生导报, 2017, 23(24): 3832-3835+3839.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1007-1245.2017.24.004

• CCR7基因
• 结肠癌
• miRNA
• 双荧光素酶报告系统

目的探讨miRNA在调控趋化因子受体CCR7表达及对结肠癌细胞增殖及侵袭的影响。方法利用生物信息学网站Target Scan、Pictar和miRanda,综合文献寻找与CCR7基因相互作用的miRNA,综合3个数据库和文献的结果选取5条miRNA分别为miR-let7、miR-21、miR-98、miR-145、miR-642研究。使用PCR方法扩增含CCR7基因3’-UTR区序列插入到双酶切的双荧光素酶报告载体中,使用lipofectamine2000转染试剂将报告载体和待筛选miRNA共转染293细胞,双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性。用迁移和transwell小室实验检测所预测的miRNA对结肠癌HCT116细胞转移和侵袭能力的影响。用Western blotting检测miRNA作用于结肠癌HCT116细胞后对CCR7蛋白表达的调控。结果得到含CCR7基因3’-UTR序列的双荧光素酶报告重组质粒,并用凝胶电泳和基因测序的方法验证。CCR7基因3’-UTR上有miRNA的调控作用靶点;双荧光素酶报告显示miR-let7、miR-21组比空白对照组CCR7基因3’-UTR双荧光素酶基因报告载体的荧光素酶活性下降。miR-let7、miR-21能显著抑制结肠癌HCT116细胞迁移和侵袭能力,并且下调CCR7蛋白在HCT116细胞中的表达。结论CCR7基因3’-UTR段双荧光素酶基因报告载体构建成功,miRNA（miR-let7和miR-21）对CCR7有负调控作用。miR-let7和miR-21能抑制CCR7蛋白的表达,并抑制结肠癌细胞转移和侵袭能力。

• 单位
  深圳市耳鼻咽喉研究所; 中山大学附属第八医院; 深圳市龙岗区耳鼻咽喉医院