PelA-Expansin融合蛋白原核重组表达研究

作者：魏玲玲; 叶凯霞; 李嘉欣; 赵庆新^*

来源：生物学杂志, 2022, 39(01): 17-45.

• 扩张蛋白基因
• 果胶酸裂解酶
• 融合表达
• 分离纯化
• 活性分析

扩张蛋白(Expansin)具有削弱细胞壁多糖之间氢键,增强多糖降解酶降解多糖的效率。在食品领域、生物能源领域和生物制药领域,具有广泛的应用价值。自然状态下,Expansin蛋白在植物、真菌、细菌等生物中的表达量较少,目前,枯草芽孢杆菌Expansin重组表达研究受到广泛关注。以来源于构巢曲霉的果胶酸裂解酶(PelA)为融合标签,构建高效表达融合蛋白PelA-Expansin的工程菌newexpansin/pelA-pET-28a(+)/BL21(DE3),在OD600为0.4、0.01 mmol/L IPTG、15℃和150 r/min下,表达24 h,融合蛋白产量约为3.0 mg/mL。建立融合蛋白一次性His-tag亲和纯化工艺,工艺中上样、清洗和洗脱缓冲液中咪唑浓度分别为30、 60和500 mmol/L,目标蛋白纯度约为95%,得率约为75%;融合蛋白协同纤维素酶、木聚糖酶和果胶酸水解酶酶降解多糖的效率分别为300%、150%和125%;为扩张蛋白Expansin在食品、能源、医药及农业等领域的应用奠定了基础。

• 单位
  盐城师范学院