小反刍兽疫病毒China/Tib/07株V蛋白的原核表达及纯化

作者：张学虎; 马旭升; 付钰广; 曾巧英; 才学鹏; 朱启运

来源：中国兽医科学, 2013, (11): 1140-1145.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2013.11.005

• 小反刍兽疫病毒
• V基因
• 原核表达
• 纯化 peste des petits ruminants virus
• Vgene
• prokaryotic expression
• purification

为获得小反刍兽疫病毒(PPRV)V基因在大肠杆菌中的表达产物,根据GenBank中China/Tib/07株的V基因序列人工合成了V基因,然后将其克隆至表达载体pGEX-4T-1,构建重组原核表达质粒pGEX-4T-1-V,经酶切鉴定和测序确认后将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达和GST亲和树脂柱纯化融合蛋白。SDS-PAGE检测结果显示,使用0.8mmol/L的IPTG在30℃、130r/min条件下诱导8h后,分子质量约为58ku的融合蛋白以可溶性状态大量表达;SDS-PAGE及Western-blot分析表明,用含有1mmol/L还原性谷胱甘肽的GST洗涤缓冲液...

• 单位
  中国农业科学院兰州兽医研究所; 甘肃农业大学; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室