食品中椰毒假单胞菌酵米亚种实时荧光PCR检测的研究

作者：林捷^*; 方陈玉; 陆晶芳; 尹丹韩; 赵奇琦; 王加胜

来源：食品安全质量检测学报, 2020, 11(11): 3538-3544.

DOI：10.19812/j.cnki.jfsq11-5956/ts.2020.11.031

• 椰毒假单胞菌酵米面亚种
• 实时荧光PCR
• TaqMan探针

目的建立食品中椰毒假单胞菌酵米面亚种实时荧光PCR检测方法。方法根据椰毒假单胞菌酵米面亚种16S～23S rRNA基因片段序列,用Oligo7设计一对特异性引物和一个TaqMan探针,摸索最佳退火温度,最佳引物和探针浓度,建立椰毒假单胞菌酵米面亚种实时荧光PCR检测方法。通过对唐菖蒲伯克霍尔德氏菌以及22种其他标准菌株进行实时荧光PCR检测,验证本法的特异性和抗干扰性。同时从菌液浓度和DNA浓度水平上进行研究,确定该检测方法的灵敏度。结果用该方法检测23种菌,除唐菖蒲伯克霍尔德氏菌外,其他22种细菌均为阴性。抗干扰性试验显示杂菌对检测结果不影响,本法抗干扰能力强。通过灵敏度试验的研究,确定本法检测椰毒假单胞菌酵米面亚种的菌液灵敏度为1×102 CFU/mL,DNA灵敏度为250 fg/μL。结论本试验设计的引物和探针具有较强特异性、抗干扰性以及灵敏度,该方法具有很好的研究价值和应用前景。

• 单位
  杭州市食品药品检验研究院