miR-527表达对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

作者：王磊; 马玲; 葛玉坤; 李龚龙; 李俊朋; 李浩然; 乔庆东^*

来源：中华泌尿外科杂志, 2020, 41(10).

• 膀胱肿瘤
• 膀胱癌
• 微小RNA 527
• 烯醇化酶1

目的探讨膀胱癌组织中miR-527的表达情况, 及其对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法收集新乡市中心医院2018年2月至2019年6月手术治疗的40例膀胱癌患者的肿瘤组织和相应的癌旁正常膀胱组织(距离肿瘤组织边缘>3 cm), 所有组织标本均经病理检查确诊。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)实验检测膀胱癌组织、癌旁正常膀胱组织、人膀胱癌细胞系(T24、UM-UC-3、5637、RT-112)和人膀胱上皮永生化细胞系(SV-HUC-1)中miR-527的表达情况。在膀胱癌细胞系中转染miR-527 mimics、miR-527 inhibitor、ENO1过表达质粒、ENO1 siRNA及相应的阴性对照, 采用CCK8实验、克隆形成实验、Transwell实验研究细胞的增殖、迁移和侵袭。荧光素酶报告基因实验验证miR-527的靶基因。蛋白质印迹法检测miR-527对靶基因表达的调控。结果与正常膀胱组织相比, miR-527在膀胱癌组织中的表达降低(1.723±1.070与1.148±0.760, P<0.05);T24(0.540±0.082)、UM-UC-3(0.230±0.053)、5637(0.463±0.085)、RT-112(0.310±0.056)中miR-527的相对表达量明显低于SV-HUC-1(0.987±0.111), 差异均有统计学意义(P<0.05)。在UM-UC-3中转染miR-527 mimics后与阴性对照组相比, CCK8实验结果显示细胞活性明显降低, 差异有统计学意义(P<0.05);克隆形成实验结果显示, 细胞克隆形成数明显降低(57.33±15.50与157.00±15.52), 差异有统计学意义(P<0.05)。T24细胞转染miR-527 inhibitor后与阴性对照组相比, 细胞活性明显升高, 差异有统计学意义(P<0.05);细胞克隆形成数明显升高(141.70±10.50与76.67±9.07), 差异有统计学意义(P<0.05)。通过TargetScan数据库预测发现ENO1是miR-527的靶基因。荧光素酶报告基因实验结果显示转染miR-527 mimics组荧光素酶活性明显低于对照组(0.47±0.10与0.99±0.02), 差异有统计学意义(P<0.05);转染pmirGLO-mt质粒后荧光素酶活性差异无统计学意义(0.96±0.05与1.03±0.04, P>0.05)。蛋白质印迹实验结果显示, 转染miR-527 mimics组细胞的ENO1表达量明显低于与阴性对照组(0.31±0.13与1.09±0.17, P<0.05), 转染miR-527 inhibitor组细胞的ENO1表达量明显高于阴性对照组(2.17±0.15与0.97±0.09, P<0.05)。与单纯转染miR-527 mimics组相比, 转染miR-527 mimics+ENO1过表达质粒能够减弱miR-527 mimics对膀胱癌细胞系增殖、迁移和侵袭的抑制作用(P<0.05);与单纯转染miR-527 inhibitor组相比, 转染miR-527 inhibitor+ENO1 siRNA能够减弱miR-527 inhibitor对膀胱癌细胞系增殖、迁移和侵袭促进作用(P<0.05)。结论 miR-527在膀胱癌中低表达, 可抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

• 单位
  新乡市中心医院; 基础医学院; 新乡医学院