变形假单胞菌ExsA蛋白表达、纯化及多克隆抗体的制备

作者：韦金平; 李云凤; 邱薇; 陈兴莆; 陈波宇; 陈新华; 覃盼^*

来源：农业生物技术学报, 2023, 31(04): 883-888.

• 变形假单胞菌
• ExsA
• 原核表达
• 蛋白纯化
• 多克隆抗体

Ⅲ型分泌系统(type Ⅲ secretion system, T3SS)是革兰氏阴性菌中普遍存在的蛋白分泌机制，是细菌毒力因子产生致病效果的重要途径。阿糖胞苷(Ara-C)型DNA结合蛋白ExsA是T3SS的主要激活因子之一，能够调控T3SS相关蛋白的表达。本研究将变形假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicida)PQLYC4菌株的ExsA基因克隆至原核表达载体pET28a(+)，将重组表达质粒pET-28a-ExsA转化至大肠杆菌(Escherichia coli) BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达。结果显示，大肠杆菌表达的重组ExsA蛋白分子量略小于30 kD，与预期分子量(29.7 kD)一致。将表达的重组ExsA蛋白进行纯化，免疫新西兰大白兔(Oryctolagus cuniculus)制备抗ExsA蛋白的多克隆抗体，效价达1∶256 000以上；利用制备的抗体，采用Western blot和间接免疫荧光方法，检测变形假单胞菌菌体中的ExsA蛋白和鲤鱼(Cyprinus carpio)上皮细胞(epithelioma papulosum cyprini, EPC)中过表达的ExsA蛋白，均可发生特异性反应。本研究为深入探讨ExsA蛋白结构及其在调控变形假单胞菌毒力因子T3SS系统中的功能提供了工具。

• 单位
  福建农林大学