质粒载体介导的短发夹RNA对RPE细胞转染效率及毒性研究

作者：蔡春梅^*; 范思均; 梁歌; 姜严明; 冯婧

来源：解剖科学进展, 2018, 24(06): 614-617.

DOI：10.16695/j.cnki.1006-2947.2018.06.015

• 质粒载体
• 视网膜色素上皮细胞(RPE)
• 细胞毒性

目的连接针对人血管内皮生长因子(VEGF)设计的短发夹RNA与质粒载体,并转染视网膜色素上皮(RPE)细胞,观察其转染效率及对细胞的毒性。方法设计针对人VEGF的短发夹RNA(shRNAs,V1,V2),V3为阴性对照即不含特异性shRNA,其表达载体为pGCSilencerTM/U6/Neo/GFP/VEGF RNAi。用LipofectamineTM 2000转染RPE细胞,用倒置荧光显微镜及流式细胞仪观察其转染效率;用MTT法观察其对细胞的毒性。结果质粒载体介导的GFP在细胞中的表达呈黄绿色,弥漫于整个胞浆和胞核,转染后24h GFP开始表达,转染后48h表达明显增强。流式细胞仪检测质粒pGCSilencerTM/U6/Neo/GFP/VEGF RNAi对体外培养的RPE细胞转染效率为43.9%,质粒转染后MTT法测定细胞活性的OD值与对照组相比明显降低(P=0.004)。结论质粒pGCSilencerTM/U6/Neo/GFP/VEGF RNAi可以有效地转染体外培养的RPE细胞,但质粒转染对细胞有明显的毒性。

• 单位
  中国人民解放军第二炮兵总医院