基于JAK2/STAT3信号通路探讨荔枝核总黄酮对HepG2增殖、迁移与侵袭的影响

作者：黎敏航; 马晓聪; 唐燕; 梁瀞云; 罗伟生^*; 黄旭平

来源：中国实验方剂学杂志, 2022, 28(22): 85-92.

DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20221522

• 荔枝核总黄酮
• 酪氨酸蛋白激酶2/信号传导及转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路
• 侵袭
• 迁移
• HepG2
• 细胞上皮间充质转化(EMT)

目的：观察荔枝核总黄酮(TFL)对人肝癌细胞HepG2株增殖、凋亡、迁移与侵袭的影响。方法：噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度TFL及顺铂对HepG2细胞增殖的影响；TdT介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检测低、中、高质量浓度TFL(70、140、210 mg·L-1)及顺铂(60 mg·L-1)对HepG2细胞凋亡的影响，并选择TFL最优浓度进行后续实验。将细胞分为空白组、TFL组(140 mg·L-1)、TFL+XL019组(140 mg·L-1+0.5μmol·L-1)、TFL+TPI-1组(140 mg·L-1+1μmol·L-1)，进行细胞划痕实验和小室侵袭实验以验证TFL对HepG2迁移和侵袭的影响；使用细胞免疫荧光技术检测TFL对HepG2细胞上皮间充质转化(EMT)标记物表达的影响；使用蛋白免疫印迹法(Westem blot)对TFL干预后细胞内的酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)/信号传导及转录激活因子3(STAT3)信号通路上关键蛋白的表达情况进行检测。结果：MTT比色法表明，与空白组比较，在24、48 h时，各质量浓度的TFL与顺铂均能显著抑制HepG2细胞增殖(P<0.01),24、48 h时TFL对HepG2的半抑制浓度(IC50)分别为(136.7±2.40)、(106.8±1.11)mg·L-1,24、48 h时顺铂对HepG2的IC50分别为(58.48±2.04)、(5.15±0.56)mg·L-1。TUNEL法发现各质量浓度TFL均可以诱导HepG2细胞凋亡，由此结果确定TFL 140 mg·L-1为最佳质量浓度。细胞划痕实验表明，与空白组比较，TFL组、TFL+XL019组、TFL+TPI-1组均明显抑制HepG2细胞的迁移能力(P<0.05,P<0.01)，与TFL组比较，TFL+XL019组的抑制作用明显增强(P<0.05),TFL+TPI-1组的抑制作用显著减弱(P<0.01)。小室侵袭实验表明，与空白组比较，TFL组、TFL+XL019组、TFL+TPI-1组干预都显著抑制了HepG2细胞的侵袭能力(P<0.01)，与TFL组比较，TFL+XL019组的抑制作用明显增强(P<0.05),TFL+TPI-1组的抑制作用则显著减弱(P<0.01)。荧光免疫结果表明，TFL的干预上调HepG2细胞上皮-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达，同时下调波形蛋白(Vimentin)的表达，这种作用在TFL+XL019组中更强，在TFL+TPI-1组中则有所减弱；Western blot结果表明，与空白组比较，TFL组、TFL+XL019组、TFL+TPI-1组并未影响JAK2和STAT3蛋白的表达水平，但是明显降低磷酸化(p)-JAK2与p-STAT3表达水平(P<0.05,P<0.01)，与TFL组比较，TFL+XL019组中的p-JAK2与p-STAT3的表达水平显著降低(P<0.01),TFL+TPI-1组中p-JAK2与p-STAT3的表达水平显著升高(P<0.01)。与空白组比较，TFL组显著增加了含sh2结构域的蛋白酪氨酸磷酸酶-1(SHP-1)表达水平(P<0.01)。结论：TFL可以抑制HepG2的增殖，促进其凋亡，还可以通过逆转HepG2细胞EMT的过程以减弱其迁移与侵袭的能力，这些作用可能与TFL激活SHP-1阻断JAK/STAT3信号通路相关。

• 单位
  广西中医药大学附属瑞康医院; 广西中医药大学