Mafb基因敲除小鼠的构建及其尿道下裂表型初步分析

作者：刘振忞; 孔晓燕; 沈炼桔; 龙春兰; 刘星^*; 魏光辉

来源：海军军医大学学报, 2022, 43(02): 152-159.

DOI：10.16781/j.CN31-2187/R.20210861

• v-maf肌筋膜纤维肉瘤癌基因同源物B
• 基因敲除
• 基因型鉴定
• 尿道下裂
• 动物模型

目的 利用成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)及其相关蛋白9(Cas9)构建v-maf肌筋膜纤维肉瘤癌基因同源物B(Mafb)基因敲除小鼠，初步研究该基因缺失对尿道发育的影响。方法 根据CRISPR/Cas9技术原理构建Mafb基因敲除F0代C57BL/6J小鼠；经PCR及基因测序鉴定阳性的F0代小鼠与野生型C57BL/6J小鼠交配繁殖，获得F1 代Mafb基因敲除杂合子(Mafb+/-)小鼠；Mafb+/-小鼠间进行交配繁殖，获得Mafb基因敲除纯合子(Mafb-/-)胎鼠。收集雄性Mafb-/-胎鼠阴茎组织，通过免疫荧光技术检测阴茎组织中Mafb蛋白表达情况及尿道缝处上皮钙黏蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达情况，扫描电子显微镜及石蜡切片H-E染色观察阴茎组织形态。结果 成功构建、繁育Mafb+/-小鼠并得到雄性Mafb-/-胎鼠。免疫荧光检测结果显示雄性Mafb-/-胎鼠阴茎组织中几乎不存在Mafb蛋白表达，且相较于野生型小鼠其尿道缝处E-cadherin蛋白表达明显降低、α-SMA蛋白表达明显增高；扫描电子显微镜及H-E染色显示雄性Mafb-/-胎鼠为尿道下裂表型。结论 成功构建Mafb基因敲除小鼠模型，该基因敲除可导致小鼠出现尿道下裂表型及尿道缝处细胞中E-cadherin和α-SMA的表达差异，为进一步研究该基因在尿道下裂发生机制中的作用奠定了基础。

• 单位
  重庆医科大学附属儿童医院