AFT024细胞对人胚胎干细胞来源造血祖细胞的体外维持作用研究

作者：朱美琪; 张博文; 吴旭敏; 李基晟; 宋妃灵; 范增; 何丽娟; 裴雪涛^*; 李艳华^*

来源：军事医学, 2022, 46(08): 561-568.

• 人胚胎干细胞
• 造血祖细胞
• AFT024细胞
• 体外特性维持

目的 建立小鼠胎肝基质细胞系AFT024细胞与人胚胎干细胞(hESC)来源造血祖细胞共培养体系，探究AFT024细胞对hESC来源造血祖细胞体外特性维持和扩增作用。方法 建立hESC向造血祖细胞定向诱导分化的培养体系，采用拟胚体诱导方法，分三阶段添加不同细胞因子获得造血祖细胞，将hESC来源造血祖细胞与AFT024细胞进行共培养，对照组为无滋养层培养组。培养4 d后，通过细胞计数、流式细胞术分析、集落培养实验等检测造血祖细胞数量、比例及造血集落形成能力的变化；通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对造血干/祖细胞增殖和分化相关基因的表达水平进行检测，以确定AFT024是否具有体外维持造血祖细胞特性的能力。结果 hESC经三阶段诱导培养14后，可分化并产生大量悬浮的造血祖细胞，CD34+CD43+细胞比例为(22.63±2.65)%,CD34+CD45+细胞比例为(23.67±2.15)%；免疫荧光染色结果显示，AFT024细胞中有α-平没肌肌动蛋白(α-SMA)及Dlk-1蛋白的表达，以其为滋养层与造血祖细胞共培养4 d后，造血祖细胞比例显著高于无滋养层培养组。造血集落形成实验结果显示，滋养层培养组产生的造血集落总数显著高于无滋养层组。结论 AFT024对hESC来源造血祖细胞的体外特性具有一定的维持作用。

• 单位
  贵州大学; 华南生物医药研究院