多重耐药鲍曼不动杆菌噬菌体Abp1毒力蛋白穿孔素的无细胞融合表达

作者：夏安越; 徐欢; 钟秋; 孙牵; **丹; 张忆恒; 杜静; 杨修竹; 甘明哲; 崔金辉^*; 刘培峰^*

来源：军事医学, 2019, 43(04): 274-281.

• 多重耐药鲍曼不动杆菌
• 噬菌体
• 穿孔素
• 无细胞蛋白合成体系

目的研究多重耐药鲍曼不动杆菌噬菌体Abp1毒力蛋白穿孔素holin(holinAbp1)的生物学特性及其对细菌的毒性作用,并通过无细胞蛋白表达系统对毒力蛋白穿孔素融合蛋白进行表达。方法利用生物信息学技术分析holinAbp1的蛋白结构特点,利用PCR技术从噬菌体Abp1基因组扩增holinAbp1基因,构建表达载体pET23bholinAbp1-gfp并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中以及无细胞蛋白体系中表达,利用Western印迹鉴定蛋白表达情况。结果噬菌体Abp1的holin蛋白属于稳定疏水性蛋白,含有3个跨膜区域,属于Phage-holin-3-1家族,成功克隆了holinAbp1-gfp基因,holinAbp1-gfp蛋白在大肠杆菌内无法正确表达,对大肠杆菌表达宿主具有明显抑制作用,而在无细胞蛋白表达系统实现了蛋白表达。结论通过无细胞蛋白表达系统实现了holinAbp1-gfp融合蛋白表达,将为毒力蛋白的表达和噬菌体治疗药物的研发提供应用基础和技术支持。

• 单位
  中国人民解放军陆军军医大学; 中心实验室; 上海交通大学医学院附属仁济医院; 第一附属医院检验科; 中国科学院苏州纳米技术与纳米仿生研究所; 第三军医大学; 西安交通大学苏州研究院