小鼠干扰素epsilon在大肠杆菌中的可溶性表达

作者：谢秋波; 常秋霜; 周鹏; 崔丽伟; 郭玲; 刘威; 张庆华; 卢根生

来源：免疫学杂志, 2017, 33(03): 245-250.

DOI：10.13431/j.cnki.immunol.j.20170044

• 干扰素
• 分子伴侣
• 原核表达
• 可溶蛋白
• 纯化

目的构建小鼠干扰素epsilon蛋白的原核表达质粒,诱导表达和纯化后获得稳定的可溶性重组蛋白。方法将目的基因克隆到表达载体p ET28a-SUMO,与能同时表达3个分子伴侣gro ES、gro EL和tig的质粒p G-tf2一起转化至大肠杆菌表达菌株BL21(DE3),用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。通过Ni-NTA亲和层析柱、Desalting柱、Q-HP柱及Superdex75分子筛层析经行纯化后,用Ulp1酶切,并对目标蛋白进行质谱分析。对目标蛋白抑制肿瘤细胞增长活性、刺激细胞产生抗病毒蛋白的活性进行鉴定。结果成功构建了重组质粒p ET28a-SUMO-IFN-ε和分子伴侣共表达,获得较多可溶性蛋白。目标蛋白酶切后仍可溶,SDS-PAGE分析显示重组IFN-ε蛋白表观相对分子质量为22 000。质谱分析证实目标蛋白的序列和小鼠IFN-ε的序列吻合。小鼠IFN-ε能够抑制肿瘤细胞的生长并能诱导细胞产生抗病毒蛋白Mx A。结论小鼠IFN-ε蛋白可以和分子伴侣一起在原核系统中以可溶形式表达,并证明此蛋白具有生物学活性。

• 单位
  大坪医院; 第三军医大学西南医院