长链非编码RNA DIGIT对血管内皮细胞的作用

作者：苗超峰; 曹海峡; 李萌; 张勇敢; 宋瑞鹏^*

来源：中华实验外科杂志, 2019, (08).

• GSC分化
• 动脉粥样硬化
• 内皮细胞
• 长链非编码RNA

目的 观察长链非编码RNA DIGIT对血管内皮细胞的作用。方法 体外培养人微血管内皮细胞(HMEC-1),通过显微镜采图观察管核比值的变化,实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和蛋白质印迹法测定血管生成相关因子mRNA和蛋白的表达水平。通过用短发夹RNA(shRNA)靶向的DIGIT转染使HMEC-1中的DIGIT表达沉默,观察DIGIT沉默对细胞活力(锥虫蓝染色法),迁移能力(Trans-Well法),细胞凋亡[膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)凋亡检测法]和管形成能力(显微镜采图法)的影响。结果 HMEC-1培养24 h后,管/核的比值随时间增加而增加,血管生成相关因子：内皮细胞生长因子(VEGF),内皮细胞生长因子受体-2(VEGFR2),CD144和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的mRNA水平均显著上调(F＝11.813、10.336、13.201、10.125 ,P<0.01)、蛋白水平随着时间的推移而累积。与对照组比较,DIGIT沉默组(sh-DIGIT)细胞的存活率显著降低[(80.29±4.68)%比(62.50±4.78)%,F＝20.386,P<0.01],细胞的迁移能力显著降低[(99.65±3.07)%比(37.53±2.78)%,F＝33.573,P<0.01],细胞的管/核比值显著降低(0.691±0.060比0.192±0.020,F＝13.471,P<0.01),血管生成相关因子VEGF、VEGFR2、CD144和eNOS的蛋白表达水平下降,凋亡抑制基因B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)蛋白表达下降,凋亡促进蛋白bcl-2相关X蛋白(bax)表达上调,活化半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3和Caspase-9表达水平升高。结论 lncRNA DIGIT在内皮细胞中起促生长,促迁移和促管形成因子的作用。

• 单位
  郑州大学第一附属医院