低氧诱导因子-1α基因体外转染内皮祖细胞的可行性及对其成内皮细胞活性的影响

作者：邵琴; 王长谦; 范华骅; 何奔; 姜萌; 高跞; 聂晓绚; 刘嬿

来源：上海医学, 2006, (10): 737-740+763.

• 低氧诱导因子
• 单个核细胞
• CD34+单个核细胞
• 内皮祖细胞
• 基因转染
• 内皮细胞

目的探讨低氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因体外转染入内皮祖细胞(EPCs)的可行性及对其表现型的影响。方法构建真核表达载体pEGFP-HIF-1α。分离外周血单个核细胞(PBMC)及脐血CD34+单个核细胞(MNCCD34+)。采用电穿孔基因转染,荧光显微镜检测转染效率,逆转录聚合酶链反应检测HIF-1α的表达。培养1周后,分为4组:A组:只加入血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导培养;B组:转染入空质粒pEGFP-C1,并加入VEGF、bFGF;C组:转染入pEGFP-HIF-1α质粒;D组:未加VEGF、bFGF诱导。采用流式细胞仪检测CD31阳性细胞百分率。结果构建的pEGFP-HIF质粒基因序列与基因库(U22431, gi:881345)HIF-1α的CDS编码区完全一致。PBMC转染效率达38％,MNC CD34+转染效率达到42％。PBMC培养1周时,A、B、C组间CD31阳性率的差异无显著性(P值均>0．05),但均显著高于D组(P值均<0．05)。MNCC CD34+培养1周后,A、B、C组间CD31阳性率的差异无显著性(P值均>0．05)。结论真核表达载体pEGFP-HIF体外电穿孔转染入PBMC,提示转染HIF-1α能促祖细胞向内皮细胞分化,效果与加入细胞因子诱导相似,其能增加祖细胞增殖活性。

• 单位
  上海市血液中心; 上海交通大学医学院附属仁济医院