β-伴大豆球蛋白α-亚基核心区的基因克隆、表达及纯化

作者：李垚熹; 袁艳秋; 巨倩; 高梦楠; 周树义; 胡亚云; 栾广忠^*

来源：食品与机械, 2020, 36(05): 15-38.

DOI：10.13652/j.issn.1003-5788.2020.05.003

• β-伴大豆球蛋白
• α-亚基
• 重组蛋白
• 克隆
• 分离纯化

利用RT-PCR技术获得了齐黄34大豆种子的全长cDNA,采用自行设计的引物对目的基因αc进行扩增,并将目的基因与载体连接,构建了重组克隆载体pGEM-αc。重组克隆载体经XhoⅠ/EcoRⅠ双限制酶酶切鉴定后,与载体pET-28a连接构建重组质粒pET-28a-αc,经菌落PCR、双限制酶酶切及测序判定准确后,将其转入到感受态细胞E.coli BL21(DE3)中,当诱导温度为37℃、菌液OD600nm值为0.8、诱导剂(IPTG)浓度为0.2mmol/L,诱导时间为9h时,重组α-亚基核心区蛋白分子质量为50kU;工程菌pET-28a-αc-BL21经超声破裂、低温离心后,上清液利用镍离子亲和层析色谱柱经AKTA蛋白纯化系统纯化可以获得较高纯度的目的蛋白。

• 单位
  西北农林科技大学