结核分枝杆菌16kD-CFP10-19kD融合蛋白的构建表达及纯化

作者：赵爽; 张新慧; 常琳; 冯书阳; 马晓蕾

来源：中国处方药, 2015, 13(12): 19-21.

• 结核分枝杆菌
• 16kD蛋白
• CFP10蛋白
• 19kD蛋白
• 融合蛋白

目的构建结核分枝杆菌(MTB)16k D-CFP10-19k D融合蛋白表达载体,在大肠杆菌中对蛋白进行表达并经过纯化获得16k D-CFP10-19k D融合蛋白。方法利用聚合酶链式反应(PCR)方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板扩增16k D、CFP10及19k D基因,经过限制性内切酶处理并依次与p ET28a载体连接,构建p ET28a-16k D-CFP10-19k D重组质粒,转化至大肠杆菌表达株BL21中,在IPTG及低温诱导下获得目标蛋白,镍柱层析获得纯化蛋白。结果经过酶切及测序鉴定验证p ET28a-16k D-CFP10-19k D重组质粒构建正确,原核表达获得可溶性目标蛋白并对其初步纯化。结论成功构建表达并纯化获得16k D-CFP10-19k D融合蛋白,为开发新的结核病特异性诊断抗原研究奠定基础。

• 单位
  沈阳市第四人民医院