基于MAPKs信号通路探讨补肾助孕方改善BN大鼠黄体功能的作用机制

作者：唐星冉; 周惠芳^*; 冯华; 尚玉洁; 袁艺祯; 代雅欣; 丁银银

来源：中国实验方剂学杂志, 2022, 28(12): 78-85.

DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20220904

• 补肾助孕方
• 丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)
• 黄体功能不全(LPD)
• 凋亡
• 卵巢

目的：探讨补肾助孕方降低黄体功能不全（LPD）自然模型-棕色挪威（BN）大鼠卵巢凋亡水平的可能作用机制。方法：使用随机数表法将50只SPF级雌性BN大鼠分为模型组、地屈孕酮组（0.002 g·kg~(-1)）、补肾助孕方低、中、高剂量组（4.5、9、18 g·kg~(-1)），给予相应药物剂量灌胃，每天1次，给药3个动情周期。使用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组大鼠c-Jun氨基酸末端激酶（JNK）、磷酸化（p)-JNK、细胞外信号调节激酶（ERK）、p-ERK、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）、p-p38MAPK、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2）相关X蛋白（Bax）、Bcl-2的蛋白表达水平，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测各组大鼠JNK、ERK、p38 MAPK、Bax、Bcl-2 mRNA表达水平，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组大鼠血清孕酮（P）和雌二醇（E_2）水平，苏木素-伊红（HE）染色观察卵巢形态。结果：与模型组比较，补肾助孕各剂量组使用1个周期后，大鼠动情周期恢复情况差异有统计学意义（P<0.05）；补肾助孕方低剂量组卵巢组织形态有所改善，中、高剂量组卵巢组织各级卵泡结构清晰，囊状卵泡及闭锁卵泡减少，颗粒细胞层数较多，黄体数增多、境界清晰、体积较大，以新鲜黄体为主；补肾助孕方低、中、高剂量组大鼠卵巢组织Bcl-2 mRNA表达水平上调，Bax mRNA表达水平下调（P<0.05,P<0.01）；补肾助孕方高剂量组大鼠卵巢组织JNK、p38 MAPK mRNA水平显著下调（P<0.01）；补肾助孕方低、中剂量组大鼠卵巢组织ERK mRNA表达水平上调（P<0.05）。与模型组比较，补肾助孕方中、高剂量组Bcl-2蛋白表达水平均显著上调（P<0.01），补肾助孕方各剂量组Bax蛋白表达水平显著下调（P<0.01）；补肾助孕方各剂量组大鼠卵巢组织中JNK、ERK、p38 MAPK蛋白表达水平差异无统计学意义；补肾助孕方中、高剂量组大鼠卵巢组织中p-ERK蛋白表达水平显著升高（P<0.01),p-JNK、p-p38 MAPK蛋白表达水平均显著降低（P<0.01）。补肾助孕方低、中、高剂量组E_2水平呈不同程度升高（P<0.05,P<0.01），补肾助孕方中剂量组P水平明显升高（P<0.05）。结论：补肾助孕方能够改善BN大鼠血清性激素，恢复动情周期，减少卵泡闭锁及囊泡化、维持黄体形态及功能，从而改善黄体功能，治疗黄体功能不全，其机制可能与调控MAPKs信号通路降低BN大鼠卵巢组织凋亡水平有关。

• 单位
  南京中医药大学; 江苏医药职业学院