科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
目的探讨微RNA (miR)-708-5p在结核性脑膜炎(TBM)小鼠脑损伤中的作用及机制。方法将48只BALB/c小鼠随机分为假手术组、TBM组、TBM+miR-708-5p inhibitor组及TBM+NC-inhibitor组,每组12只。TBM组、TBM+miR-708-5p inhibitor组及TBM+NC-inhibitor组小鼠经尾静脉注射0.2 m L结核分枝杆菌H37Rv菌悬液(2.5×109CFU·L-1)制备TBM模型,假手术组小鼠给予等体积磷酸盐缓冲液。造模成功后,TBM+miR-708-5p inhibitor组、TBM+NC-inhibitor组小鼠分别经尾静脉注射0.2 m L miR-708-5p inhibitor (2 mg·kg-1)和NC-inhibitor (2mg·kg-1),每2 d注射1次,连续1周。将对数生长期小鼠脑膜细胞GIBH001根据转染载体的不同分为对照组、miR-708-5p过表达组、补体C1q肿瘤坏死因子相关蛋白1(C1qtnf1)过表达组及miR-708-5p+C1qtnf1过表达组,分别转染NC-mimic和Vector、miR-708-5p mimic和Vector、NC-mimic和pc DNA-C1qtnf1、miR-708-5p mimic和pc DNA-C1qtnf1;另根据转染载体的不同,将GIBH001细胞分为空白组、NC-inhibitor组及miR-708-5p inhibitor组,空白组细胞不做处理,NC-inhibitor组、miR-708-5p inhibitor组细胞分别转染NC-inhibitor、miR-708-5p inhibitor。采用干湿法检测各组小鼠脑组织含水量;采用伊文思蓝实验检测各组小鼠血脑屏障通透性;采用酶联免疫吸附法检测各组小鼠脑组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测小鼠脑组织中miR-708-5p和C1qtnf1 mRNA相对表达量以及各组GIBH001细胞中C1qtnf1 mRNA相对表达量;采用Western blot法检测各组小鼠脑组织中和对照组、miR-708-5p过表达组、C1qtnf1过表达组、miR-708-5p+C1qtnf1过表达组GIBH001细胞中磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化蛋白激酶B (p-Akt)蛋白相对表达量。结果 TBM组小鼠脑组织同侧基底神经节含水量显著高于假手术组(P <0.05); TBM+miR-708-5p inhibitor组小鼠脑组织同侧基底神经节含水量显著低于TBM+NC-inhibitor组(P <0.05); 4组小鼠对侧皮质、对侧基底神经节、同侧皮质、小脑含水量比较差异均无统计学意义(P> 0.05)。TBM组小鼠血脑屏通透性显著高于假手术组(P <0.05);TBM+miR-708-5p inhibitor组小鼠血脑屏障通透性显著低于TBM+NC-inhibitor组(P <0.05)。TBM组小鼠脑组织中TNF-α、IL-1β水平均高于假手术组(P <0.05); TBM+miR-708-5p inhibitor组小鼠脑组织中TNF-α、IL-1β水平显著低于TBM+NC-inhibitor组(P <0.05)。与假手术组比较,TBM组小鼠脑组织中miR-708-5p的相对表达量显著升高(P <0.05),C1qtnf1 mRNA相对表达量显著降低(P <0.05);与TBM+NC-inhibitor组比较,TBM+miR-708-5p inhibitor组小鼠脑组织中miR-708-5p的相对表达量显著降低(P <0.05),C1qtnf1 mRNA相对表达量显著升高(P <0.05)。miR-708-5p过表达组细胞中C1qtnf1 mRNA相对表达量低于对照组(P <0.05); C1qtnf1过表达组细胞中C1qtnf1mRNA相对表达量高于对照组(P <0.05); miR-708-5p+C1qtnf1过表达组细胞中C1qtnf1 mRNA相对表达量显著低于C1qtnf1过表达组(P <0.05); miR-708-5p+C1qtnf1过表达组细胞中C1qtnf1 mRNA的相对表达量与对照组比较差异无统计学意义(P> 0.05)。NC-inhibitor组细胞中C1qtnf1 mRNA相对表达量与空白组比较差异无统计学意义(P>0.05); miR-708-5p inhibitor组细胞中C1qtnf1 mRNA相对表达量显著低于空白组(P <0.05); miR-708-5p inhibitor组细胞中C1qtnf1 mRNA相对表达量显著低于NC-inhibitor组(P <0.05)。TBM组小鼠脑组织中p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt显著高于假手术组(P <0.05); TBM+miR-708-5p inhibitor组小鼠脑组织中p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt显著低于TBM+NC-inhibitor组(P <0.05)。miR-708-5p过表达组细胞中p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt均显著低于对照组(P <0.05); C1qtnf1过表达组细胞中p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt均显著高于对照组(P <0.05); miR-708-5p+C1qtnf1过表达组细胞中p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt均显著低于C1qtnf1过表达组(P <0.05); miR-708-5p+C1qtnf1过表达组细胞中p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt与对照组比较差异无统计学意义(P> 0.05)。结论 miR-708-5p可促进TBM小鼠脑损伤的发生,其机制可能与下调C1qtnf1的表达、抑制PI3K/Akt信号通路有关。
-
单位唐都医院; 神经内科; 西安市儿童医院
