变异链球菌绿色荧光蛋白报告株在双菌种生物膜研究的应用

作者：李晓岚; 王肖; 凌均棨^*; 胡晓莉; 邓动梅

来源：中华口腔医学研究杂志(电子版), 2019, 13(03): 136-143.

• 变异链球菌
• 戈登链球菌
• 绿色荧光蛋白报告株
• 双菌种生物膜
• 抗药性

目的探讨变异链球菌(S.mutans)绿色荧光蛋白(GFP)报告株在单、双菌种生物膜的形成、代谢和抗药性研究的应用。方法采用基因重组技术构建S.mutans GFP报告株C67-1 pDM15和UA159 pDM15;通过荧光显微镜和荧光光度计,评估报告株转化效率、生长能力和荧光表达规律;构建S.mutans GFP报告株与戈登链球菌(S.gordonii)的单、双菌种生物膜,比较单、双菌种生物膜中S.mutans的生物膜形态、糖代谢活力及氯已定(CHX)作用下的抗药性差异。数据运用单因素方差分析、Pearson相关性分析与独立样本t检验进行统计学分析。结果 S.mutans GFP报告株可稳定地表达gfp基因,生长能力和生物膜形成能力与野生株相似;生物膜加入0.2%的葡萄糖后荧光量迅速增加,可检测细菌代谢改变,4 h的相对荧光增长值(ΔRLU)可反映生物膜量,二者显著相关(r=0.9818～0.9985,P<0.001);S.gordonii改变S.mutans C67-1和UA159的生物膜结构,抑制UA159菌株生物膜的形成;剩余荧光增长率[ΔRLU(%)]反映耐药能力,单菌种生物膜C67-1和UA159的ΔRLU(%)相似,分别为(70.2±8.0)%和(72.3±7.9)%(t=-0.521,P=0.630),在双菌种生物膜中S.mutans的ΔRLU(%)发生改变,与各自单菌种生物膜相比差异有统计学意义:C67-1升高至(85.6±4.3)%(t=-2.872,P=0.045),UA159降低至(41.2±10.1)%(t=3.551,P=0.024)。结论 S.gordonii对S.mutans生物膜形成能力和抗药性的改变具有亚型差异。GFP报告株可作为多菌种生物膜定量与空间结构研究的模式菌。

• 单位
  中山大学