GoldenBraid酶切连接反应体系的优化

作者：徐美慧; 张耀杰; 唐克轩; 苗志奇^*

来源：生物技术通报, 2020, 36(09): 266-274.

DOI：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2020-0161

• GoldenBraid
• 优化
• 有效克隆
• 酶切连接效率

旨在获得更为高效稳定的GoldenBraid(GB)酶切连接组装反应体系。通过优化GB反应中酶切时间、缓冲体系、限制性内切酶和底物配伍来提高有效克隆的效率,确定最佳反应体系。结果显示,4 min酶切时间,1 μL FastDigest Buffer(10×)缓冲体系,1 mmol/L ATP,0.5 μL FastDigest Esp3I 或FastDigest Eco31I,元件供体载体与受体载体的摩尔比3∶1时,有效克隆比例接近99%,是优化前(BsmBI 8%、BsaI 23%)的4倍以上,此时酶切连接效率接近100%。与原始方案相比,通过体系的优化,可以在更少内切酶用量(原方案为1 μL)的情况下,显著提高有效克隆比例,表明本方法能提高GB系统的酶切连接效率和实用性。

• 单位
  上海交通大学