NCSTN基因沉默对HaCaT细胞增殖分化的影响

作者：张婉璐; 张媛媛; 吴英达; 程萍; 李文锐; 徐浩翔; 王宝玺; 何艳艳^*; 李诚让^*

来源：中华皮肤科杂志, 2020, 53(09): 704-709.

• 化脓性汗腺炎
• 基因沉默
• 角蛋白细胞
• 细胞增殖
• 细胞分化
• 角蛋白质类
• HaCaT细胞
• NCSTN基因

目的检测NCSTN基因稳定沉默的人永生化角质形成细胞(HaCaT)增殖活性及相关分化蛋白的改变, 初步探索反常性痤疮发病的可能机制。方法构建慢病毒介导shRNA沉默NCSTN基因的HaCaT细胞模型(shRNA组), 转染空载慢病毒的HaCaT细胞作为阴性对照组, 实时定量PCR和Western印迹法检测NCSTN基因的沉默效率。CCK8法检测HaCaT细胞增殖活性, 实时定量PCR和Western印迹法检测HaCaT细胞角蛋白(CK1、CK5、CK7、CK10、CK14、CK16、CK17、CK18、CK19、CK20)及其他分化分子(内披蛋白、兜甲蛋白)mRNA和蛋白的表达。两组计量资料的比较采用两独立样本t检验。结果 shRNA组NCSTN mRNA及蛋白表达(0.42 ± 0.19、0.30 ± 0.07)均显著低于阴性对照组(1.00 ± 0.34、1.00 ± 0.26;t = 5.196、2.637, P < 0.001、< 0.05), 基因沉默效率达70%。与阴性对照组相比, shRNA组HaCaT细胞明显增殖活跃, CK16、CK19蛋白表达显著下调(t = 3.787、3.817, P < 0.01、< 0.05), 终末分化分子内披蛋白表达明显降低(t = 2.904, P < 0.05)。结论稳定沉默NCSTN基因表达会引起HaCaT细胞异常增殖分化, 为后续探究NCSTN基因突变引起反常性痤疮提供新思路。

• 单位
  中国医学科学院; 蚌埠医学院第一附属医院; 北京协和医学院