酶切位点缺失的跨膜型TNF-α突变体的构建及其功能的研究

作者：陈克清; 刘牧云; 刘涛; 于敏; 冯玮; 姜晓丹; 李卓娅; 王晶

来源：现代免疫学, 2010, 30(04): 288-292.

• tmT NF-α
• 酶切位点
• 胞毒

采用重叠PCR技术,构建TNF转化酶(TACE)酶切位点缺失的Δ1-12tmTNF-α和Δ1-9,K11EtmTNF-α突变体,并构建Δ1-12tmTNF-α-pcDNA3.0和Δ1-9,K11EtmTNF-α-pcDNA3.0重组质粒。通过ELISA、MTT、Western blot技术,研究2种突变体生物学功能的变化。结果显示Δ1-12tmTNF-α和Δ1-9,K11EtmTNF-α都不能被TACE剪切,Δ1-12tmTNF-α的胞毒效应明显低于野生型,且不能诱导NF-κB活化。而Δ1-9,K11EtmTNF-α既保留了野生型tmTNF-α的胞毒效应,又能诱导NF-κB活化。以上表明Δ1-9,K11EtmTNF-α突变体既丧失被酶解的能力,又能保留tmTNF-α正反向信号传递能力,为进一步研究tmTNF-α生物学功能提供了有力的工具。

• 单位
  华中科技大学同济医学院; 第一临床学院