微小隐孢子虫Ⅰ型跨膜蛋白Cgd7＿4560的亚细胞定位及其对HCT-8细胞的黏附特性

作者：邵清延; 王科杰; 王东强; 张天宇; 焦新; 尹继刚^*

来源：吉林农业大学学报, 2019, 41(03): 359-364.

DOI：10.13327/j.jjlau.2019.4223

• 微小隐孢子虫
• Ⅰ型跨膜蛋白
• 原核表达
• 亚细胞定位

型跨膜蛋白在顶复门寄生虫入侵宿主细胞过程中发挥重要作用。试验对微小隐孢子虫Ⅰ型跨膜蛋白Cgd74560进行生物信息学分析,选取抗原性强的序列,采用PCR方法扩增出微小隐孢子虫DNA Cgd74560部分基因。将该片段分别连接到p ET-28a和p GEX-4T-1载体,构建重组表达质粒p ET-28a-Cgd74560和p GEX-Cgd74560,并将其转化到大肠埃希氏杆菌BL21 (Condon plus),IPTG诱导表达获得重组蛋白。SDSPAGE和Western blot分析,His标签重组蛋白为31 ku,GST标签重组蛋白为53 ku。用His标签重组蛋白免疫家兔,间接ELISA方法检测血清抗体效价达到1∶16 000,成功制备多克隆抗体。采用Western blot方法验证该抗体能够特异性的识别虫体天然蛋白,间接免疫荧光分析该蛋白在子孢子头端,间接ELISA结果表明GSTCgd74560能与HCT-8细胞黏附,为其功能研究奠定了基础。

• 单位
  吉林大学