miR-23b通过调控ATG12抑制宫颈癌细胞自噬并逆转顺铂耐药性

作者：杨晓钟; 马文霞; 葛鹏^*; 郑明

来源：临床肿瘤学杂志, 2021, 26(10): 877-884.

• 宫颈癌
• miR-23b
• 顺铂耐药
• 自噬相关基因-12(ATG12)
• 自噬

目的探讨microRNA-23b(miR-23b)通过调控自噬相关基因-12(ATG12)的表达抑制宫颈癌细胞自噬并逆转顺铂耐药性的作用机制。方法采用顺铂长期浓度梯度递增法体外建立He La/DDP耐药细胞株,分别转染阴性空质粒(miR-NC组)和miR-23b mimics (miR-23b mimics组),另将未经处理的He La/DDP细胞作为空白对照组,将自噬诱导剂雷帕霉素干预细胞作为miR-23b mimics+雷帕霉素组。采用实时荧光定量PCR(q PCR)法和Western blotting法检测miR-23b和ATG12表达。双荧光素酶报告实验分析miR-23b的靶基因。采用MTT法和Annexin V/PI双染法检测各组细胞对顺铂的敏感性。另外采用电镜和共聚焦显微镜观察各组细胞自噬体的形成情况。结果历时6个月,成功建立He La/DDP细胞,其耐药指数为14.613±0.319。与He La细胞比较,He La/DDP细胞中miR-23b表达量下降(1.02±0.13 vs.0.45±0.08),而ATG12蛋白表达量升高(0.31±0.03 vs.0.90±0.08),差异有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶报告实验显示,ATG12是miR-23b下游靶基因。与空白对照组和miR-NC组比较,miR-23b mimics组He La/DDP细胞中GFP-LC3绿色荧光的细胞质小点明显减少,且ATG12蛋白表达量降低(P<0.05);但是miR-23b mimics+雷帕霉素组细胞中出现大量GFP-LC3荧光小泡。经流式细胞术检测,miR-23b mimics组He La/DDP细胞凋亡率明显高于空白对照组和miR-NC组,而miR-23b mimics+雷帕霉素组细胞凋亡率则低于miR-23b mimics组(P<0.05)。结论 miR-23b与宫颈癌细胞对顺铂获得性耐药有关,而ATG12是miR-23b抑制耐药细胞自噬的下游蛋白。

• 单位
  西安医学院第二附属医院