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摘要
目的从活性氧簇(ROS)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体信号通路探讨乳脂球表皮生长因子8(MFG-E8)抗移植肺缺血再灌注损伤的作用机制。方法健康雄性SD大鼠50只, 随机分为对照组、移植组和MFG-E8组, 袖套改良法建立大鼠左肺移植模型。MFG-E8组受体鼠术前30min经尾静脉注射rhMFG-E8 20 μg/kg, 对照组和移植组受体大鼠尾静脉注射同等量生理盐水。肺移植再灌注2 h后阻断右肺门5min, 全自动血气分析检测仪检测动脉血中氧分压(PaO2)和二氧化碳分压(PaCO2)。苏木精-伊红(HE)染色观察移植肺组织显微病理改变, 原位缺口末端标记法(TUNEL)染色检测移植肺组织细胞凋亡指数。组织活性氧检测试剂盒(DHE)检测肺组织中ROS水平, 干/湿法测量肺湿质量/干质量(W/D)比。蛋白免疫印迹(Western blot)法检测肺组织NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-1(Caspase-1)、和凋亡相关的斑点样蛋白(ASC)蛋白表达水平。酶联免疫吸附法(ELISA)检测肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)表达水平。组间比较使用t检验, 多组比较采取单因素方差分析。结果再灌注2 h后, HE染色可见移植组肺组织明显炎性细胞浸润、肺泡结构破坏、肺水肿、肺泡腔内渗出明显伴有一些红细胞;MFG-E8组肺组织炎性细胞浸润明显减少, 未见明显肺水肿, 肺泡结构基本完整。再灌注2 h后, MFG-E8组动脉PaO2/FiO2显著高于移植组[(314.35±58.13) mmHg比(212.76±42.19) mmHg, t=4.473, P<0.05];MFG-E8组肺组织ROS水平、细胞凋亡指数和W/D值均明显低于移植组[102.37±20.78比145.72±29.34、(20.36±5.37)%比(28.13±4.64)%、6.15±1.23比8.51±1.83, t=3.813、3.462、3.385, P<0.05]。移植组大鼠肺组织NLRP3、Caspase-1和ASC蛋白水平表达明显高于对照组(0.42±0.18比0.20±0.11、0.28±0.12比0.12±0.10、0.65±0.15比0.40±0.13, t=3.298、3.239、3.983, P<0.05);MFG-E8组大鼠肺组织NLRP3、Caspase-1和ASC蛋白水平表达显著低于移植组(0.25±0.12比0.42±0.18、0.15±0.10)比(0.28±0.12、0.44±0.10比0.65±0.15, t=2.485、2.632、3.684, P<0.05)。移植组大鼠肺泡灌洗液中IL-1β和IL-18蛋白水平表达明显高于对照组[(105.74±34.73) pg/ml比(70.8±7.25) pg/ml、(128.56±23.82) pg/ml比(93.48±14.53) pg/ml, t=3.114、3.975, P<0.05];MFG-E8组大鼠肺泡灌洗液中IL-1β和IL-18蛋白水平表达显著低于移植组[(80.16±8.35) pg/ml比(105.74±34.73) pg/ml、(95.50±13.18) pg/ml比(128.56±23.82) pg/ml, t=2.265、3.840, P<0.05]。结论 MFG-E8可能通过下调ROS/NLRP3信号通路, 抑制NLRP3炎症小体活化, 减轻氧化应激和免疫炎性反应, 发挥抗移植肺缺血再灌注损伤作用。
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