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摘要
目的探讨核转录因子-κB(NF-κB)信号通路在法舒地尔诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经元分化中的作用。方法取培养至少4代以上的大鼠MSCs, 分为无血清培养基对照组(A组)、法舒地尔组(B组)及法舒地尔+脂多糖组(C组);A组只加无血清DMEM培养基, B组加诱导液(含终浓度200 μmol/L法舒地尔的DMEM培养基900 μL+10%胎牛血清100 μL), C组加诱导液(含终浓度200 μmol/L法舒地尔和1000 μg/L脂多糖的DMEM培养基900 μL+10%胎牛血清100 μL);分别诱导6 h。随后采用倒置荧光显微镜观察各组细胞形态变化, 采用细胞荧光免疫组化法检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经元微管结合蛋白(MAP-2)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达, 采用实时定量PCR(RT-PCR)检测cyclin D1 mRNA及MAP-2 mRNA的表达, 采用Western blotting检测3组细胞cyclin D1及MAP-2蛋白的表达。结果 (1)A组MSCs基本保持扁平、突起稀少, B组及C组可见神经元样细胞明显增多, 形成典型神经网络。其中B组MSCs向神经元分化速度快, C组MSCs向神经元分化速度较慢, 神经元网络较B组稀少。(2)荧光免疫组化结果显示, 与A组比较, B组及C组NSE与MAP-2表达量均明显增加, cyclin D1表达均明显下降, 差异均有统计学意义(P<0.05)。3组细胞的GFAP表达率均小于1%, 差异无统计学意义(P>0.05)。(3)RT-PCR与Western blotting结果显示, 与A组比较, B组及C组的cyclin D1蛋白及mRNA表达均明显减少, MAP-2蛋白及mRNA表达均明显增加, 差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 NF-kB信号通路通过调节cyclin D1表达参与法舒地尔诱导大鼠MSCs向神经元分化的作用。
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