用于MERS-CoV核酸检测的假病毒阳性对照品制备及鉴定

作者：周冬根^*; 李云鹏; 罗洁; 李军花; 余军平; 危宏平

来源：中国国境卫生检疫杂志, 2019, 42(04): 233-238.

DOI：10.16408/j.1004-9770.2019.04.002

• 中东呼吸综合征冠状病毒
• 假病毒
• 病毒样颗粒
• 阳性对照

目的制备安全、稳定的含有中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)靶基因片段的假病毒颗粒阳性对照品。方法人工合成含up E、ORF1b以及N基因片段的MERS-CoV核苷酸序列,连入慢病毒表达载体,将重组慢病毒表达载体与包装质粒同时转染HEK293T-17细胞,利用透射电镜观察重组假病毒颗粒形态,用荧光定量RT-PCR方法检测假病毒包装情况,并进行稳定性、均一性以及线性试验。结果测序分析显示,3个基因片段正确克隆至载体pCMVMCS-GFP-PURO,经大肠杆菌表达可形成直径约为100 nm的均一、球形重组假病毒颗粒。不同浓度样品在不同温度条件下存放数日仍保持稳定,不同浓度样品、不同组别的Ct值的变异系数均小于0.1%。结论成功构建了含有upE、ORF1b以及N基因片段的MERS-CoV假病毒颗粒,可作为阳性对照品实现对核酸提取与检测过程全程监控。

• 单位
  中国科学院; 中国科学院武汉病毒研究所