EMA-qPCR方法快速检测番茄溃疡病菌活菌研究

作者：周大祥; 熊书

来源：西南农业学报, 2017, 30(01): 99-104.

DOI：10.16213/j.cnki.scjas.2017.1.018

• 番茄溃疡病菌
• 叠氮溴乙锭(Ethidium monoazide bromide,EMA)
• 实时荧光定量PCR(q PCR)

将叠氮溴乙锭(EMA)与实时荧光定量PCR技术相结合(EMA-q PCR),建立一种有效快速检测番茄溃疡病活菌的方法。以番茄溃疡病菌Pat-1基因为检测靶标,菌体经EMA渗透处理,再进行q PCR特异性扩增。结果显示,q PCR检测灵敏度为1.0×101CFU/m L;当EMA的浓度为2.0μg/m L时,能有效抑制1.0×107CFU/m L灭活死菌的扩增,对活菌的扩增没有影响。当活菌数在1.0×1011.0×105CFU内,每个q PCR反应体系中活菌CFU数与Ct值呈线性相关(R2=0.987)。不同温度处理后EMA-q PCR检测番茄溃疡病菌的存活情况并与平板计数法进行比较,表明待检样品可在4和20℃短期保存。对疑似带病番茄种子样品进行EMA-q PCR检测,发现EMA-q PCR方法能减少番茄溃疡病菌PCR检测的假阳性结果。本研究建立的EMA-q PCR方法是一种能有效检测番茄溃疡病活菌的方法,并能有效避免PCR检测实际样品可能造成的假阳性结果。

• 单位
  生命科学学院; 重庆三峡学院; 重庆三峡医药高等专科学校; 重庆大学