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摘要
目的：对1株新的变形杆菌（Proteus）噬菌体进行分离、鉴定与生物学特性及基因组分析。方法：将实验室从牦牛屠宰环节中分离到的菌株纯培养后，对其DNA提取进行16S rRNA测序，鉴定获得宿主菌，采集四川成都牦牛屠宰场环境污水，以获得的宿主菌进行噬菌体分离；运用双层琼脂平板法进行噬菌体的分离纯化，测定噬菌体的最佳感染复数、一步生长曲线和噬菌体耐受性等；通过磷酸负染、透射电镜观察噬菌体的形态；采用试剂盒提取噬菌体全基因组DNA，使用Illumina MiSeq测序平台进行噬菌体全基因组测序，对噬菌体全基因组序列进行组装、注释和基因组学分析。结果：从67株分离菌株中鉴定出10株Proteus，并从污水中分离得到1株可裂解变形杆菌和粪肠球菌（Enterococcus faecalis）并且裂解性较强的噬菌体，命名为Proteus phage PV66；其最佳感染复数为0.1，一步生长曲线结果显示，感染宿主菌的潜伏期约为10 min，裂解期约为80 min，平均裂解量为321 PFU/cell；耐受pH值范围为3～12，耐受温度为65℃。电镜观察该噬菌体为C3形态噬菌体，其头部长（140±1）nm、宽（54±2）nm，尾部长为（36±1）nm。基因组测序结果表明PV66全序列长度为90 492 bp，系统发育树分析发现该噬菌体与奇异变形杆菌（P. mirabilis）噬菌体和克诺罗杆菌（Cronobacter）噬菌体同源性较高，与non-Kuravirus属处于同一分支。结论：本研究分离到1株新的变形杆菌噬菌体并具有良好的应用潜力，为进一步开发噬菌体类新型抗菌剂提供基础，同时也丰富了变形杆菌噬菌体的数据库。
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