MiR-216a-5p靶向TRIP4对乳腺癌细胞放射敏感性的影响及机制研究

作者：杨霞; 汤山松; 谢仲梅; 张群

来源：广西医科大学学报, 2021, 38(01): 61-68.

DOI：10.16190/j.cnki.45-1211/r.2021.01.010

• miR-216a-5p
• TRIP4
• 乳腺癌
• 放射敏感性
• 增殖
• 凋亡

目的:研究miR-216a-5p对乳腺癌细胞放疗敏感性的影响及其作用机制。方法:培养正常乳腺上皮细胞MCF10A和乳腺癌细胞MCF7、MDA-MB-231、SK-BR-3,用实时荧光定量PCR(qPCR)检测miR-216a-5p和甲状腺激素受体相互作用蛋白4(TRIP4)的表达;将乳腺癌细胞MCF7分为Control组(未做任何处理)、si-con组(转染TRIP4干扰载体阴性对照质粒)、si-TRIP4组(转染TRIP4干扰载体质粒)、miR-con组(转染miR-216a-5p模拟物阴性对照)、miR-216a-5p组(转染miR-216a-5p模拟物)、si-TRIP4+anti-miR-con组(共转染TRIP4干扰载体质粒和miR-216a-5p抑制剂阴性对照)、si-TRIP4+anti-miR-216a-5p组(共转染TRIP4干扰载体质粒和miR-216a-5p抑制剂);用Western blotting检测蛋白的表达;MTT法检测细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡率;分别用0 Gy、2 Gy、4 Gy、6 Gy和8 Gy剂量的射线照射Control组、si-con组、si-TRIP4组、miR-con组、miR-216a-5p组、si-TRIP4+anti-miR-con组、si-TRIP4+anti-miR-216a-5p组细胞,用细胞克隆形成实验检测细胞放射敏感性;将TRIP4野生型(TRIP4-WT)和突变型(TRIP4-MT)荧光素酶表达载体分别与miR-con和miR-216a-5p共转染至MCF7细胞中,用双荧光素酶报告基因实验检测细胞荧光活性。结果:与正常乳腺上皮细胞MCF10A相比,乳腺癌细胞MCF7、MDA-MB-231、SKBR-3中TRIP4 mRNA和蛋白表达水平升高,miR-216a-5p表达水平降低(P<0.05)。沉默TRIP4和过表达miR-216a-5p后,细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达水平降低,半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)表达水平升高,细胞增殖抑制率显著升高,细胞凋亡率显著升高(P<0.05),射线照射后细胞存活分数降低(P<0.05)。miR-216a-5p与TRIP4-WT共转染的细胞荧光素酶活性显著降低(P<0.05),而miR-216a-5p与TRIP4-MT共转染的细胞荧光素酶活性无明显变化(P>0.05)。沉默TRIP4逆转了抑制miR-216a-5p表达对乳腺癌细胞增殖、凋亡和放射敏感性的作用。结论:过表达miR-216a-5p可能通过下调TRIP4抑制乳腺癌细胞增殖、促细胞凋亡,从而增加了细胞的放射敏感性。

• 单位
  资阳市人民医院