OPN诱导小鼠MSCs向表皮细胞分化促进创面愈合的研究

作者：王文平; 李薇; 陈亮; 王珍祥; 李世荣

来源：第三军医大学学报, 2015, 37(07): 594-599.

DOI：10.16016/j.1000-5404.201410131

• 愈合
• 间充质干细胞(MSCs)
• 骨桥蛋白(OPN)
• 表皮
• 分化

目的以骨桥蛋白(osteopontin,OPN)基因敲除小鼠及野生型小鼠为研究对象,探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)分化为表皮细胞的潜能及骨桥蛋白在分化过程中的作用。方法体外实验:将分离培养的野生型(WT)和基因敲除型(KO)新生鼠(鼠龄1 d)MSCs鉴定纯度后分别设为WT组和KO组,取其第3代分别在表皮转化培养体系中孵育,通过镜下观察、流式细胞术、免疫荧光染色、Western blot等方法,比较两组表皮细胞标志物(CK14)表达水平的差异。动物实验:实验分4组,WT组小鼠创周注射GFP-MSCs(WT/MSCs)组,WT小鼠创周注射PBS(WT/PBS)组,KO小鼠创周注射GFP-MSCs(KO/MSCs)组,KO小鼠创周注射PBS(KO/PBS)组,每组各8只雄鼠,鼠龄68周,体质量2025 g,按分组将分离培养的GFP-MSCs和PBS注射到创周,观察创面愈合及GFP-MSCs向表皮细胞分化的情况。结果分离培养的MSCs呈梭形或成纤维细胞样生长,流式细胞术检测MSCs的纯度超过91%;诱导分化第12、17天的两组细胞检测发现,WT组和KO组的细胞均表达CK14;第17天免疫荧光结果示WT组CK14的表达阳性率(0.936 3±0.009 5)明显高于KO组(0.647 5±0.023 1),(P<0.01);Western blot检测结果也显示KO组的CK14表达量(0.389 4±0.016 8)明显低于WT组(0.614 6±0.015 3),(P<0.01)。动物实验WT/PBS组创面愈合速度快于KO/PBS组(P<0.05),WT/MSCs组的创面愈合速度快于WT/PBS组(P<0.05),注射的GFP-MSCs向表皮细胞分化的能力WT/MSCs组强于KO/MSCs组(P<0.05)。结论 OPN在体内、体外均可诱导MSCs分化为表皮细胞,进而促进创面愈合。

• 单位
  蚌埠医学院; 第三军医大学西南医院