VPA0961对副溶血弧菌运动能力的调控

作者：唐浩; 仇越; 袁睿韬; 黄新祥; 张义全^*

来源：江苏大学学报(医学版), 2019, 29(03): 248-252.

DOI：10.13312/j.issn.1671-7783.y190025

• 副溶血弧菌
• VPA0961
• 鞭毛
• 游动
• 爬动

目的:构建vpa0961基因突变株及其回补株,并初步探究VPA0961对副溶血弧菌运动能力的调控作用。方法:以副溶血弧菌RIMD2210633野生株的基因组DNA为模板,PCR扩增得到vpa0961的同源臂融合片段,并克隆至自杀质粒pDS132多克隆位点。将pDS132重组质粒通过结合转移的方式转入野生株,进而通过同源重组方法替换原始vpa0961,制备vpa0961无痕突变株(Δvpa0961)。PCR扩增vpa0961整个编码区序列,并将其直接克隆入pBAD33质粒,获得重组回补质粒。将回补质粒结合转移到Δvpa0961中,然后通过特异性引物PCR鉴定并外送测序以获得回补株。将副溶血弧菌的预培养物接种于游动(swimming)和爬动(swarming)平板,37℃静置培养,比较不同菌株间菌苔直径的差异。采用qRT-PCR分析鞭毛蛋白基因lafA、flaB和flaF的mRNA表达水平。结果:特异性扩增及序列分析显示,成功构建vpa0961基因突变株和回补株;与野生株相比,Δvpa0961游动能力和爬动能力明显减弱(t=14. 06,36. 37,P <0. 05);与野生株相比,Δvpa0961 lafA、flaB和flaF mRNA转录水平明显降低(t=185. 2,56. 36,50. 24,P <0. 05)。结论:成功构建vpa0961的基因突变株和回补株,且VPA0961对鞭毛基因的转录具有正调控作用。

• 单位
  江苏大学